在本实验室几千倍扩增细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞培养方案下，为了优化CIK细胞的培养方案并进一步推广到临床，本文比较了无血清培养基X-Vivo 15、成年人AB血浆（ABP）、脐带血血浆（CBP）和胎牛血清（FBS）对CIK细胞增殖、表型和毒性的影响。人外周血单个核细胞分别以四种培养基诱导CIK细胞，细胞增殖、表型和毒性的测定分别用MTT增殖分析法，流式细胞分析法，乳酸脱氢酶细胞毒性分析法。

实验结果如下：ABP组细胞扩增倍数最大（图1），20天达到649倍（574-974倍），FBS组细胞扩增倍数最小，20天扩增175倍（5-887倍），二者有显著差异（P<0.05，n=7），其它各组之间无显著差异。X-Vivo 15组和CBP组扩增倍数分别为274倍（33 -364倍）、363倍（175 -412倍），ABP组和CBP组具有较稳定的细胞扩增能力，而X-Vivo 15组和FBS组的细胞扩增倍数变化范围很大。各组都可以诱导出CD3+CD56+细胞，即CIK细胞。第15-16天，X-vivo15组、ABP组、CBP组和FBS组CIK细胞比例分别为22.5%±9.1%、25.6%±6.8%、32.4%±7.9%和16.7%±4.3%，各组之间细胞表型无显著差异（P>0.05，n=7）。X-vivo15组的NK毒性和LAK毒性均十分低（图2），与其它各组差异极显著（P<0.01，n=7）。ABP组、CBP组和FBS组的NK毒性分别为47.6%±9.4%、66.5%±9.8%、42.1%±7.3%，CBP组的NK毒性大于ABP组和FBS组，但无统计学意义。

本研究说明血浆对于CIK细胞毒性的形成有着十分重要作用，临床应用时有必要添加一定浓度的血浆。然而其它的研究结果显示无血清培养基AIM-V诱导的CIK细胞却可以形成明显毒性，这种差异可能是由于两种无血清培养基成分的不同。另外，值得注意的是X-vivo15组细胞的高比例CD3+CD56+表型和该细胞极低的细胞毒性，说明CIK细胞的CD3+CD56+表型和细胞毒性之间可能并没有直接的相关性。由于胎牛血清成分的不确定性，胎牛血清原则上不能用于临床治疗。成年人血浆和脐带血血浆除了可以形成较高毒性的CIK细胞外，在扩增方面既有很强的促进细胞增殖能力，同时具有相对的扩增稳定性。脐带血血浆在临床异体移植中存在一定的局限性，例如来源有限、检验繁琐等，所以成年人血浆更有临床意义。

图1：培养基对细胞增殖的影响,基本培养基RPMI1640，γ-干扰素（1000U/ml ），CD3单抗（10ug/ml），白细胞介素

-2(500U/ml)

图3：培养基对细胞毒性的影响，15-16天， 靶细胞：K562细胞（NK毒性）和RAJI细胞（LAK毒性），效靶比：30：

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